《生化危机：0》发售于2002年11月11日。
讲述的是：1998年7月23日，浣熊市郊区一辆正在行驶的保护伞公司的火车遭到变异水蛭的袭击，与此同时浣熊市警察局派出STARS的精英小队（布拉瓦小队）前往浣熊市郊区调查最近的多起杀人食人猎奇凶杀事件。
小队乘坐直升机飞往事件频发的现场，却在途中直升机引擎因过度害怕停止工作，于是小队被迫降落，随后发现破坏的囚车和惨死的海军，小队队长下达追踪囚犯比利的命令后分开行动，我们的0代女主角瑞贝卡进入火车调查，遇到了从未见过的丧尸以及比利。
由于眼前的种种问题，两人开始合作却意外地来到了保护伞公司在浣熊市的研究所，发现已经和水蛭变异结合的马库斯博士，两人阻止了马库斯的复仇，随后逃离研究所，并在两人合作的过程中瑞贝卡对比利改观，之后谎称比利死亡。
《生化危机0》的历史可以追溯到1999年，CAPCOM在99年”东京电玩展秋”上公布了N64版的《生化危机0》。当时由于N64版《生化危机2》的顺利完成，让CAPCOM相信在卡带媒体上推出”生化危机”同样可行。于是《生化危机0》的消息开始不断公布。人们很快就知道了该作中将全新登场的Billy Coen。CAPCOM称，玩家们将会在该作中揭开《生化危机1》中残留的一些迷题，并将知道更多有关安布雷拉公司和STARS Bravo分队的情况。2000年E3大展和”东京电玩展春”上CAPCOM公开了《生化危机0》20％完成度的试玩版，在当时就出现了瑞贝卡和比利同屏辅助行动的设定。然而在E3之后，与《生化危机1.5》一样，《生化危机0》一度开始沉寂，CAPCOM不再发布有关该作的任何消息。有流言称该作已经转移平台甚至可能已经终止开发。然而就是在2001年9月，三上真司发出那番惊动业界的宣言……
据”生化0″开发者表示，尽管经历几次延期，《生化危机0》的开发进展还是相当顺利的。该开发组也意识到一张卡带的容量确实不够，而增加卡带则意味着大幅提升成本。于是该作就被考虑移植到任天堂即将发售的NGC平台上。因而NGC上的《生化危机0》事实上并没有在N64的基础上做出太大的改变，只是在画面上有了翻天复地的大变化。
2002年E3大展上，NGC版《生化危机0》正式亮相。尽管复刻版《生化危机》超高水平的画面表现，让玩家们对于《生化危机0》的画面表现并没有太多惊异之处，然而由于是原创作品，该作还是吸引了大批玩家的注意。NGC版《生化危机0》在2002年11月与美日两地同步上市，虽然不可能再现以往地辉煌，不过相对NGC有限地拥有量而言，游戏地销量还算是相当不错的。在日本当即就获得了销量冠军，而在美国方面也位列前十，该作在美国发售时展开了极大的宣传造势活动，其所取得的成绩也超过了复刻版《生化危机》。
Bravo小队的直升机失事并降落在浣熊市森林，各队员于是准备分开搜索该地区。瑞贝卡在搜索列车中遇见了疑为杀人犯的比利。列车后来启动并撞到安布雷拉训练施设附近的隧道里，而这里曾经是由James Marcus博士所负责，此人曾是威斯克和威廉姆博士的导师然而他却在几年前神秘失踪。
瑞贝卡和比利的一举一动似乎总是被威斯克和威廉姆所监控，而一位年轻的神秘男子似乎一直掌握着他们的行动进程，而他似乎与威斯克及威廉姆也有敌意。原来此人正是詹姆斯博士，几年前被威斯克与威廉姆博士陷害并夺取了试验成果，或许是命不该绝感染了”水蛭皇后”病毒。最后瑞贝卡和比利利用其怕光的弱点将其一举击灭了。
《生化危机0》的情节解开了系列中的诸多谜题，还让人们更多地了解了威斯克以及威廉姆博士的背景。在游戏系统方面也加入了不少新要素。异次元箱的设定消失，这一点让一些玩家们有点不大适应，不过也因此带来了一些全新的玩法。另外最明显的特色就是玩家要不断切换控制两位主角才能顺利进行游戏，另外解迷方面也需要两个人的通力配合，而两个人合作作战也带来一些很有趣的作战方法。另外该作在难度上也是系列最高的，游戏中弹药非常有限，玩家们经常都要辛辛苦苦的将子弹省下来到BOSS战中再用。
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